《人参皂苷Rg3对肿瘤放疗患者外周血淋巴细胞的免疫增强作用》

　　文献来源：《中国药学杂志》

　　文献作者：张仲苗 江波 郑筱祥

　　研究目的：观察人参皂苷Rg3对肿瘤化疗患者外周血淋巴细胞的免疫增强作用。

　　研究方法：分离纯化肿瘤化疗 外周血淋巴细胞，不同Rg3浓度共培养48h或72h后用流式细胞仪进行各项指标测定，观察Rg3对淋巴细胞增殖 率、细胞膜表面分子表达率及Th1/Th2细胞的影响。

　　研究结论：Rg3能增强肿瘤患者外周血淋巴细胞的免疫功能，包括体液免疫、细胞免疫和非特异性免疫。

文献节选：

“肿瘤是目前世界上死亡率最高的疾病，肿瘤的治疗一直是研究的重点和热点。许多研究表明，当机体免疫 力低下时，机体对肿瘤细胞的免疫监视功能减弱，且免疫功能低下的肿瘤患者预后也差。因此，肿瘤的发生 发展与机体免疫功能有密切联系。放疗是目前肿瘤治疗的主要手段之一，然而研究表明，放疗会使患者的免疫 功能进一步降低，甚至给患者生命带来危害。因此，在放疗的同时加用免疫增强药物对延长患者生命， 生活质量有重要意义。

2 实验方法

2.1 淋巴细胞分离纯化 肿瘤患者放疗后24 h，取患者外周血，经淋巴细胞分离液分离出淋巴细胞，RPMI1640+10 %新生牛血清洗两遍，2500 rpm/min离心10 min，RPMI1640+10 %新生牛血清培养基重悬，贴壁去除贴壁细胞，调整细胞终浓度2.5×106个/ml，接种于96孔培养板，每孔100 ml。

2.2 淋巴细胞增殖率的测定[4] Rg3粉剂溶于二甲亚砜（DMSO）中常温保存，使用前用RPMI1640配置成不同度，DMSO终浓度<0.1 %。Rg3分别按高剂量（100 mg/ml）、中剂量（25 mg/ml）、低剂量（5 mg/ml）、对 （加以等剂量的DMSO）加入上述培养孔中。然后每孔加ConA终浓度为2 mg/ml。37 ℃、5 ％CO2培养72 h， 细胞，经流式细胞仪测定增值率。

2.3 淋巴细胞膜表面分子表达率的测定 Rg3分别按上述剂量加入培养孔中。37℃、5 ％ CO2培养72小时。上述细胞分别加不同抗体（CD3,CD4,CD8,CD56+16,HLA-DR,HLA-ABC等抗体），室温反应20分钟，PBS洗两遍 500 ml PBS重悬，经流式细胞仪测定。

2.4 细胞因子的测定

Rg3分别按上述剂量加入培养孔中。37 ℃、5 ％CO2培养48 h。取上述细胞， RPMI1640+10 %新生牛血清洗一遍并重悬，取400 ml悬液，分两管，A管中加入： Monensin工作液；B管中加入：PMA工作液 + Ionomycin工作液 + Monensin工作液。37 ℃、5 ％CO2 孵育4 h，PBS洗一遍，加入适量光标记CD3抗体，CD8抗体，孵育20 min，用FIX&PERM CELL PERMEABILEZATION KIT破膜固定，加入适量荧光 记IL-2抗体，IFN-gamma抗体，IL-4抗体，IL-10抗体，孵育一段时间20 min，PBS洗涤一次，去上清，适量 重悬细胞沉淀，上机检测。以IL-2, IFN- gamma阳性淋巴细胞为Th1细胞,以IL-4,IL-10阳性细胞为Th2细胞。

3.1 Rg3对肿瘤放疗患者外周血淋巴细胞增殖的影响 不同剂量的Rg3作用于肿瘤放疗患者外周血淋巴细胞72h后，与对照相比，均能显著促进有丝分裂原ConA诱导的细胞增殖（P<0.01）, 且呈剂量依赖关系。

3.2.1 Rg3使淋巴细胞HLA-DR和HLA-ABC的表达上升。中剂量（25 mg/ml）、低剂量（5mg/ml）的Rg3均能使 HLA-DR阳性细胞率显著升高(P<0.01)。其中，中剂量Rg3升高HLA-DR表达作用最强。高剂量Rg3（100 mg/ml HLA-DR表达的升高作用较前两种剂量弱，与对照比仍有统计学差异（P<0.05）。三种剂量中，中、高剂量Rg3HLA-ABC表达较对照组高(P<0.01)。

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　　资料来源：中国知网