研究文献 | 20( R)-人参皂苷Rg3人体药代动力学研究

摘要:

目的：研究20( R)-人参皂苷 Rg3( GRg3)人体药代动力学。

方法：高效液相色谱-紫外检测法。

结果：8名健康志愿者单剂量口服3.2 mg·kg -1 GRg 3，其药时曲线符合口服吸收有滞后时间的二房室模型，T max为( 0.66 ±0.10) h，Cmax为( 16 ±6) ng·mL -1 ，T1/ 2α为( 0.46±0.12) h，T1/2β为( 4.9 ±1.1) h，T1/2( K a)为( 0.28 ±0.04) h, AUC0 -∞为( 77±26) ng·mL -1·h ;6名健康志愿者单剂量口服0.8 mg·kg -1 GRg3，由于血药浓度低，可测数据点少，未进行模型模拟;两组给药剂量与相应C max实测值比较，二者成正比关系。

结论：本品口服吸收快，消除也较快，但血药浓度很低。在所试剂量范围内，GRg3属一级动力学吸收、消除过程。

关键词：20( R )-人参皂苷Rg3 ;高效液相色谱法;药代动力学

20(R)-人参皂苷Rg3( ginsenoside Rg 3，GRg3)是从人参分离提纯的四环三萜类人参二醇型皂苷单体。药理实验证明有较明显的抑制多种癌细胞浸润和转移的活性[1-3]，并有抗疲劳、增强机体免疫力等功能[4]。以GRg3为主要成分的抗癌新药Rg3参胶囊已获国家药品监督管理局颁发的中药一类新药证书。有关GRg3人体药代动力学研究尚未见报道。为了阐明人口服GRg3的药代动力学规律，给临床合理用药提供必要资料，我们建立了高效液相色谱法( high-performance liquid chromatography, HPLC)对健康男性进行了该药人体药代动力学研究。

材料与方法

药品和试剂 GRg3 :大连天富科技开发有限公司天然药物研究所研制，规格胶囊10 mg/粒，批号: 980501;GRg3标准品由大连天富科技开发有限公司天然药物研究所提供，含量99.69 %;甲醇，乙腈均为色谱醇；异丙醇，分析纯；超纯水。

仪器 日本导津LC-10AD HPLC泵;美国光谱物理公司Spectra100紫外可见波长检测器;中科院大连化物所WDL-95工作站、DL-1型固相萃取器、Sep-Pak萃取柱;北京天鹏超声波清洗机;法国Millipore纯水制备仪。

色谱条件Hypersil C18柱, 200 mm ×4.6 mm ID, 5 μm, 中科院大连化物所依利特公司;Hypersil C18预柱, 40 mm ×4.0 mm ID, 10 μm， 中科院大连 化物所依利特公司;流动相：乙腈-异丙醇-水( 43∶1∶ 56) ;流速:0.8 mL·min-1, 检测波长：UV 203 nm ;检测灵敏度：0.001 AUFS ;进样量：100μL 。

血浆样品的制备 取血浆2.5 mL加60 %甲醇2.5 mL，震荡混匀，离心( 3 000 r·min -1) 10 min, 全部上清液过Sep-Pak萃取柱，用60 %甲醇4 mL和70 %甲醇2 mL依次冲洗杂质，然后用90 %甲醇1.5 mL 洗脱并收集馏分，于氮气流室温水浴吹干，残留物待测前用60 %甲醇150μL定容，进样100μL分析，以外标峰面积定量。

受试者 14名男性健康志愿者，年龄( 22.9±2.4)岁，体重( 60.4±5.0) kg。于试验前经全面体 格检查，血尿常规、肝肾功能、血压及心电图均正常。试验前两周停止服用任何药物，试验期间未用任何其他药物并禁忌烟酒。 给药方法及血样采集14名健康志愿者按个体随机分成 3.2 mg·kg -1大剂量组及0.8 mg·kg -1小剂量组。受试者于试验前日晚20∶00开始禁食，试验当日晨8∶00空腹用150 mL 温开水服药，4 h 后统一进食标准餐。服药后受试者被安排在I期临床观察室内休息，避免长时间卧床和剧烈运动。自始至终保证受试者的安全与健康。于服药前( 0 h) 及服药后0.25, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 4.0, 6.0, 8.0, 10.0和12.0 h分别由前臂静脉采血6 mL，分离血浆并于-20℃冻存待测。

数据分析 对受试者测得的GRg3血药浓度时 间数据用中国药理学会数学专业委员会编制的实用药代动力学计算程序( 3P97)处理，并求算药代动力学参数。

结果

1 GRg3色谱行为及专一性在上述条件下分析，GRg3的保留时间为16 min，血浆内源性物质不干扰对其原形药的含量测定，结果见图1。

2 血浆样品标准曲线

取空白血浆2.5 mL，加入不同浓度GRg3标准溶液，使血浆中药物浓度分别为2.5, 5, 10, 20, 50, 100和200 ng·mL -1，按血浆样品制备方法操作，以GRg3浓度(C)对峰面积(A)进行线性回归。 GRg3在2.5 -200 ng·mL -1线性关系良好，标准曲线方程为A =-28.96 +342.54C ( n =5, γ=0.9999) 。GRg3在血浆中的最低检测限为2.5 ng·mL -1。

3 回收率和精密度试验

配制5, 20, 100 ng·mL -1 3个浓度的GRg3血浆样品，按血浆样品制备方法操作，计算方法回收率、日内及日间变异。结果表明在5, 20, 100 ng·mL -1 3个浓度下方法回收率为97.97 % - 99.36 %，日内及日间RSD均<5 %，结果见表1。

4 健康志愿者

GRg3药代动力学

4 .1口服Rg3的血药浓度8名健康受试者单剂量口服大剂量3.2 mg·kg -1 GRg 3后各时间点所测得的GRg3血药浓度-时间曲线见图2。结果表明口服该药吸收迅速，血浆药物浓度呈快α相，慢β相衰减，在2 h处有一转折。而6名健康受试着单剂量口服0.8 mg·kg -1 GRg3后，血药浓度很低，给药后30 min血浆中可测到药物，1 h达峰，其峰浓度为 ( 4.4±0.8) ng·mL -1 。由于仅少数时间点测到药物，无法对其动力学模型进行模拟，也无法进行药代动力学参数计算。大剂量组的Cmax实测值为( 18.5±6.9) ng·mL -1，近似为小剂量组C max实测值( 4.4±0.8) ng·mL -1的4倍。而大剂量组的给药剂量恰为小剂量组的4倍。随剂量增大， C max成正比增大，提示在所试剂量范围内GRg3属于一级动力学吸收、消除过程。

4 .2 GRg3的药代动力学参数

将8名受试者血药浓度-时间数据经3P97程序拟合，符合口服吸收有滞后时间的二室模型。根据二室模型求得的在正常人体内的药代动力学参数见表2。Tmax为( 0.66±0.10) h，Cmax 为( 16±6) ng·mL -1，说明药物吸收很快，但血药浓度很低。T1/2α为( 0.46±0.12) h，T 1/ 2β为( 4.9±1.1) h，提示本品分布和从血浆消除都较快。

讨论

测定生物样品中药物含量常用的预处理方法是液相萃取法，该法步骤繁琐，干扰大，价格昂贵且回收率不稳定[5]。因而我们选用固相萃取法进行血浆样品预处理，不仅提高了G Rg3在生物样品中的回收率，而且该法简便、易行[6]。G Rg3在203 nm处有最大吸收，而该波长条件下人体内源性干扰物较多，不易分离，为此我们选用多种条件流动相进行探索。最后为提高灵敏度以适应该药口服后血药浓度低的要求，我们选择了乙腈-异丙醇-水( 43∶1∶56) 为流动相，其保留时间延长到16 min，使得该分析方法符合生物样品分析要求。本文研究表明，正常国人口服GRg3后药物从胃肠道吸收很快，服药后15 -30 min即可在血浆中测到原形药，给药后1 h左右血药浓度可达峰值。GRg3口服后T1/2α为( 0.46±0.12) h，T1/2β为( 4.9 ±1.1) h，表明本品在人体内分布快与消除快。值得注意的是GRg3口服后血浆浓度很低， 3.2 mg·kg -1口服后的C max值仅为( 16±6) ng·mL -1, 0.8 mg·kg -1 口服后的Cmax值仅为( 4.4 ±0.8) ng·mL -1 。一般认为，口服后血药浓度很低的原因大致有三[7] ：一是口服后经胃肠道吸收的药量少;二是口服后进入胃肠道药物被胃肠道内酶或肠道细菌所代谢;三是药物虽可被胃肠粘膜吸收，但药物被肠壁或肝脏的酶所代谢，即众所周知的首过效应。有关GRg3 口服后很低究系何种原因，本文未做分析，有待进一步研究。

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