人参Rg3对荷瘤机体免疫调节性T细胞的干预作用及机制研究

肿瘤的发生发展是个多因素参与的过程，其中机体的免疫系统在肿瘤的发病机制中占有重要的地位。因而机体免疫功能状态与肿瘤的关系一直是人们试图阐明的重要问题，在肿瘤细胞在与免疫系统的较量中，肿瘤细胞可以通过多种途径来逃避机体的免疫识别与攻击。

肿瘤相关的免疫抑制细胞和免疫抑制因子是肿瘤免疫逃逸的主要机制。早在30年代就提出了机体内可能存在具有抑制功能的免疫细胞，这种细胞可通过抑制免疫应答从而促进肿瘤生长，但是由于这群细胞表型及功能的不清楚，这一观点一直受到免疫学家的争议，直到1995年日本学者Sakaguchi等发现CD4+CD25+T组分的T细胞转到裸鼠体内会引发多种自身免疫性疾病，随后体外研究进一步证实CD4+CD25+Treg细胞具有低反应性和免疫抑制功能。在保持自身耐受和免疫稳定的同时，也以某种机制抑制着免疫系统对肿瘤细胞的免疫应答，因此，CD4+CD25+Treg细胞不但可能在肿瘤逃逸、促进肿瘤的生长中发挥作用，也可能是肿瘤疫苗和免疫增强剂难以奏效的原因。

中医理论关于肿瘤的发生发展与正气内虚相关的理论与现代医学关于肿瘤与免疫的理论不谋而合，多年来的研究证明扶正中药发挥抗肿瘤作用主要机制是对荷瘤机体免疫功能的调节，而对于扶正中药是否对肿瘤免疫耐受具有调节作用，目前尚不明了，因此本研究以我国传统补益类中药人参中的主要成分人参皂苷Rg3为代表，以与肿瘤免疫耐受密切相关的CD4+CD25+Treg细胞为切入点,分别从动物实验方面观察人参皂苷Rg3对荷瘤机体免疫逃逸细胞CD4+CD25+Treg的调节作用，探讨扶正中药治疗肿瘤的具体免疫调节机制，主要进行了以下三个方面的研究：

1.人参皂苷Rg3对小鼠Lewis肺癌肿瘤生长与转移的作用观察

以小鼠Lewis肺癌细胞为模型分别从体内体外观察人参皂苷Rg3对肿瘤生长的影响，体外实验以MTT法检测人参Rg3对Lewis肺癌细胞增殖的影响；体内实验建立Lewis肺癌移植肿瘤模型以肿瘤体积变化、抑瘤率、肺重、肺转移灶数目评价人参皂苷Rg3的作用，体外实验结果表明人参皂苷Rg3不具有直接抑制Lewis肺癌细胞生长的作用。体内实验结果显示：人参皂苷Rg3治疗组小鼠肿瘤生长缓慢，抑制率为28.6%，与模型对照组相比有差异（P＜0.05）。人参皂苷Rg3治疗组荷瘤鼠双肺重量低于对照组，肺转移灶计数明显少于模型组（P＜0.05），说明人参皂苷Rg3对Lewis肺癌移植肿瘤的生长及转移具有一定的抑制作用，但这种抑制作用可能与直接的细胞毒作用无关。  
  

2.人参皂苷Rg3对Lewis肺癌荷瘤小鼠CD4+CD25+Treg及免疫监视功能的影响

研究结果显示应用人参皂苷Rg3可使Lewis肺癌小鼠脾脏、引流淋巴结中CD4+CD25+Treg的数量下降，因此，应用人参皂苷Rg3治疗使荷瘤鼠的肿瘤生长速度延缓、转移灶数目减少，原因之一是通过降低CD4+CD25+Treg细胞的数量，削弱CD4+CD25+Treg细胞对CD4+、CD8+T细胞等效应细胞的抑制功能，使免疫效应细胞能够正常发挥对肿瘤细胞的识别和杀伤功能，抑制肿瘤的生长。
    

3.人参皂苷Rg3减少Lewis肺癌荷瘤小鼠CD4+CD25+Treg机制的研究

IL-10、TGF-β不仅是CD4+CD25+T发挥免疫效应的抑制因子，同时与趋化因子CCL22一起被认为是肿瘤源性诱导CD4+CD25+T产生及募集到肿瘤组织形成免疫赦免区域的关键因素。采用Elisa、RT-PCR分别检测荷瘤小鼠血清、转移灶组织中IL-10、TGF-β、CCL22、及效应细胞因子IFN-γ表达。结果显示：荷瘤小鼠外周血TGF-β、IL-10、CCL22均较正常组升高，RT-PCR也得到一致的结果，说明肿瘤生长过程中可分泌免疫抑制因子，诱导CD4+CD25+T的扩增，介导肿瘤免疫逃逸，蛹虫草可同时减少荷瘤小鼠外周血、肿瘤转移灶组织TGF-β、CCL22的表达水平， 而对IL-10的变化无显著作用，同时效应性性细胞因子IFN-γ表达增加，这提示我们Rg3抑制Lewis肺癌的生长转移灶可能是通过降低与CD4+CD25+T生成、抑制功能相关因子，减少CD4+CD25+Treg 数量，从而恢复机体的抗肿瘤免疫功能。